是制作菌种，即通过孢子或组织分离出菌丝体，菌丝体扩大繁殖成为生产菌种；是将菌种接种于基质中，生产出食用菌的子实体。食用菌菌种是食用菌菌种生产和科研工作的基本材料。食用菌生产的菌种来源于野生食用菌资源，我国丰富的食用菌资源为我国食用菌产业的发展奠定了坚实的基础。食用菌菌种的最初来源是来自于野生食用菌资源，采用孢子或组织分离法分离得到食用菌菌种，然后把该菌种进行人工驯化、菌种选育，得到具有生产价值的食用菌菌种。母种是食用菌生产的经菌丝体，菌丝体扩大繁殖成为生产菌种；而该过程必须在无菌环境中以无菌操作进行，以防杂菌污染。一般在接种箱，无菌室或超净工作台上进行接种。
接种前要对环境进行消毒，一般是用37%~40%甲醛溶液于接种前按5ml/m3的量熏蒸半小时。也可用紫外灯照射半小时，以杀死空气中的微生物。
适合食用菌生长繁殖的混合培养料称培养基，由于不同的食用菌生长繁殖需要相应的营养条件及适宜的酸碱度。，在配制培养基时，还要根据所使用的配方，按次序配制培养基，并调节pH等。在液体培养基中加入琼脂等凝固剂后，就可制成试管斜面或在培养皿内倒成平板，成为用途广泛的食用菌母种培养基。
1.把马铃薯洗干净，去皮，挖掉芽眼，切成大约25px3的小方块，在天平上称取200g。
2.把切好的马铃薯小块倒入铝锅中，加水1000ml，煮沸15~30min。
3.用纱布（2~3层）过滤。
4.滤液加水至1000ml，加入蔗糖及琼脂。
5.加热使琼脂完全熔化。
6.趁热加入分装筒。分装于试管中（装量为1/5），塞棉花塞。
7.高压灭菌（121℃,30分钟）后，排成斜面。
